■ 制品内容 (Code No.: RR037A)
5X PrimeScript Buffer (for Real Time)*1 400 μl
PrimeScript RT Enzyme Mix I*2 100 μl
Oligo dT Primer (50 μM) 100 μl
Random 6 mers (100 μM) 400 μl
RNase Free dH2O 1 ml
EASY Dilution (for Real Time PCR)*3 1 ml
*1 含有dNTP Mixture 和 Mg2+。
*2 含有RNase Inhibitor。
*3 用于制作标准曲线时梯度稀释total RNA和cDNA。EASY Dilution (for Real Time PCR) 可以将其稀释至很低浓度也能够得到准确地稀释。本制品不影响反转录和PCR反应，用其稀释后的样品可直接使用。EASY Dilution (for Real Time PCR) 也可以单独购买（Code No. 9160/9160Q）。
注意：EASY Dilution请与本公司Real Time PCR试剂组合使用，对于其他公司的同类制品的适用性本公司尚未进行确认。
■ 制品说明
本制品是Real Time RT-PCR用的理想反转录反应试剂。使用具有较强延伸能力的PrimeScript RTase可以在较短时间内高效合成Real Time PCR用cDNA。操作简单，适合进行高通量分析。进行2 Step Real Time RT-PCR反应时，与TB Green Premix Ex Taq II (Tli RNaseH Plus)(Code No. RR820Q/A/B)*、TB Green Fast qPCR Mix (Code No. RR430S/A/B)* ， TB Green Premix Ex Taq (Tli RNaseH Plus) (Code No. RR420Q/A/B)* 、 或Probe qPCR Mix (Code No. RR391S/A/B) 试剂配合使用，能进行高性能的基因表达分析。 本制品提供了TB Green分析法和探针分析法各自适合的反应体系，可以根据分析方法选择体系。
■ 保存
-20℃。
■ 试剂盒特长
1. 可以快速、高效合成Real Time PCR用cDNA，是进行2 Step Real Time RT-PCR反应的理想试剂。
2. 含有Oligo dT Primer和Random 6 mers两种反转录引物，可根据实际情况区别使用。反转录反应可以使用Random 6 mers或Oligo dT Primer，也可以Oligo dT Primer和Random 6 mers同时使用。只扩增一种目的基因时，也可以使用Specific Primer作为反转录引物。
3. 本制品提供了TB Green qPCR分析法和探针qPCR分析法各自适合的反应体系，可以根据分析方法选择体系。
注意：以下是TB Green qPCR分析法和探针qPCR分析法进行反转录实验的区别
① 用于反转录实验RT Primer Mix添加量。
② 用于反转录实验total RNA的添加量。
4. Real Time RT PCR定量需要建立标准曲线，建立标准曲线的条件就是需要将总RNA和反转录cDNA稀释到较低的浓度。如果用水或TE Buffer稀释时，由于模板浓度低不稳定，因而会缩小曲线范围，结果准确度降低。本制品中附加了标准曲线制作用稀释液EASY Dilution (for Real Time PCR)，将Total RNA或cDNA稀释至低浓度时也能够进行准确稀释，容易在宽广范围内获得准确定量的标准曲线。
■ 使用注意
1. 当同时需要进行数次反应时，应先配制各种试剂的混合液 (Master Mix；其中包括RNase Free dH2O、Buffer、酶等)，然后再分装到每个反应管中。这样可使所取的试剂体积更准确，减少试剂损失，避免重复分取同一试剂。同时也可以减少实验操作或实验之间产生的误差。
2. 用PrimeScript RT Enzyme Mix I 时使用前要小心地离心收集到反应管底部。由于酶保存液中含有50%的甘油，粘度高，分取时应慢慢吸取。同时，要使用精确、量程适合的移液枪，并且不要使Tip插入液面过深，否则会因Tip壁粘着造成损失。
3. 分装试剂时务必使用新的枪头 (Tip)，以防止样品间污染。