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■ 制品内容
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E.coli HB101 Electro-Cells
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50 μl × 10
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pBR322 plasmid (10 pg/μl)
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10 μl
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SOC Medium*
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1 ml × 10
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*SOC Medium: 2%
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Tryptone
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0.5%
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Yeast extract
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10 mM
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NaCl
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2.5 mM
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KCl
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10 mM
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MgSO4
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10 mM
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MgCl2
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20 mM
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Glucose
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■ 制品说明
E. coli HB101是Takara Bio特别制备的适用于电穿孔法的制品。用高电压脉冲电流瞬间击穿细胞的细胞质膜，从而使外源DNA转入宿主细胞内的转化方法称为电穿孔法。通过此种方法制备的感受态细胞转化效率高、产量大，尤其适合在短时间内将少量样品转入大肠杆菌内。
E. coli HB101电转细胞可用于制备DNA文库或重组质粒的亚克隆。此电转细胞不能进行蓝白斑筛选。
■ 细胞浓度
>1×1010 bacteria/ml
■ Genotype
E. coli HB101：supE44, △(mcrC-mrr), recA13, ara-14, proA2, lacY1, galK2, rpsL20, xyl-5, mtl-1, leuB6, thi-1
■ 保存
-80℃。
注意： -80℃或更低温度下保存。如果保存温度不能恒定，转化降低将会降低。请使用附带的pBR322照质粒来确认保存细胞的转化效率。不能液氮保存。
■ 质量标准
转入10 pg 的pBR322，涂于含有Amp+ 的选择培养基进行筛选。
转化效率 : >5 x 108 cfu/μg pBR322
■ 注意事项
1. 将Electro-Cells从-80℃取出后请立即置于干冰/乙醇中。使用前保存于干冰/乙醇中。
2. 当使用50 μl Electro-Cells时，添加不多于10 ng的高纯度样品DNA。否则会降低转化效率。
3. 当改变实验规模时，适当改变反应条件。
4. 导入分子量较大的DNA (＞7 kb) 时，转化效率降低。
5. 使用TE buffer制备DNA样品。DNA样品溶液中高盐浓度可能会降低转化效率。
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6. L-broth 或φb-broth可替代SOC培养基。此时，转化效率可能会降低。
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·L-broth :
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Ingredient
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per liter water
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Tryptone
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10 g
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Yeast extract
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5 g
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NaCl
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5 g
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用1 N NaOH调整pH7.5左右并高压灭菌。
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·φ b-broth:
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Ingredient
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per liter water
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Tryptone
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20 g
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Yeast extract
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5 g
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MgSO4·7H2O
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5 g
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用1 N KOH调整pH7.5左右并高压灭菌。
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·L-plates
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Ingredient
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per liter water
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Tryptone
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10 g
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Yeast extract
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5 g
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NaCl
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5 g
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用1 N NaOH调整pH到7.5，添加agar到1.5%，高压灭菌。
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7. Electro-Cells一旦解冻，不能再次冻结保存。如果再次冻结不可避免，将细胞置于干冰/乙醇中快速冻结，于-80℃保存。但是，转化效率可能会降低至少一个数量级。