■ 制品内容 (Code No.: 6023)
Ligation Mix 150 μl × 5
按每次反应使用7.5 μl 进行计算，可使用100次。
■ 制品说明
DNA片段连接反应频繁用于基因工程实验操作中。DNA的连接通常使用T4 DNA Ligase，但DNA片段的末端形状对T4 DNA Ligase连接反应速度影响很大。因此，根据DNA片段末端形状需要调整酶的添加量和反应时间。本公司研发的DNA Ligation Kit，不需要调整酶添加量和反应时间，可简便、快速地进行DNA连接反应。
DNA Ligation Kit〈Mighty Mix〉是以往DNA Ligation Kit 的升级产品，连接效率高。本制品具有以下特点：
1) 预混型
是酶和Buffer的预混型试剂，只需在DNA中加入Ligation Mix溶液即可高效完成连接反应，操作简便。本制品反复冻融后，反应性能仍然稳定。
2) 也适用于平滑末端和TA克隆
不仅适用于粘性末端连接，也可以高效地进行平滑末端的DNA连接和TA克隆。
3) 连接反应仅需5分钟
25℃反应5分钟即可完成插入片段与质粒载体的连接，节省实验时间。
DNA Ligation Kit的反应液量和反应条件
克隆编号
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DNA溶液：Ligation Mix (体积比)
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反应条件
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[1] 质粒载体中插入外源DNA片段
[标准操作流程]
[快速操作流程]
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1：1
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[2] PCR产物的T载体克隆
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1：1
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16℃，30分钟
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[3] 线性DNA的分子内连接 (自身环化)
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1：1
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16℃，30分钟
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[4] Linker Ligation，Adaptor Ligation质粒载体中插入linker DNA cDNA与连头 (Linker、 Adaptor) 连接
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16℃，30分钟
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[5] λ噬菌体中插入外源DNA片段(体外包装)
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1：2
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26℃，10分钟
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* 说明书提供的实验结果是表中使用DNA Ligation Kit获得的实验数据，仅供参考。
■ 保存
-20℃。使用前在冰上融化 (5-10分钟)，吸打混匀。已证实反复冻融50次对反应性能没有影响。
■ DNA Ligation Kit的操作原理图
■ 使用注意
1. DNA Ligation是-20℃保存的冷冻品，反复冻融不会失活。使用前在冰上融化，吸打混合。
2. 使用本试剂盒获得的DNA连接反应液，可直接用于琼脂糖凝胶电泳。如果进行聚丙烯酰胺凝胶电泳时，建议乙醇沉淀后再进行电泳。
3. DNA连接反应液直接进行苯酚抽提时，反应液会出现白色浑浊。
4. DNA连接反应后进行乙醇沉淀处理时，向反应液中加入1/10体积的3 M CH3COONa (pH5.2) 或1/20体积的5 M NaCl和2-2.5倍体积的无水乙醇，-20℃静置20分钟或-80℃静置10分钟后，4℃离心回收DNA。DNA含量较少时，加入Carrier使沉淀效果更好。