描述:RNA极易降解。纯化的RNA溶解于无RNase的TE或水中,即便是储存于−20 oC也难免降解。为解决这一问题,可以将RNA沉淀或RNA溶液直接溶解于RNA溶解-长效保存液中,允许4 oC 过夜或−20 oC保存至少2年,保护样品RNA免于降解。RNA溶解-长效保存液是RNA样品运输和中长期保存的最佳选择。需要时可用常规乙醇法沉淀回收RNA,或直接吸取储存于RNA溶解保护液中的高浓度RNA(4 mg/ml)进行RNA电泳、Northern Blot。
储存:4oC保存 12个月有效
用RNA溶解-长效保存液溶解RNA沉淀:
1 a) 对固体RNA沉淀而言,每0.4-4 mg RNA沉淀加入1 ml RNA溶解-长效保存液,室温振荡15-30分钟溶解沉淀。干燥的RNA沉淀难以溶解,可50 oC加热15分钟或4oC溶解过夜。最好先用小体积无RNase的TE或水溶解RNA沉淀,然后按液态RNA操作。
b) 对液态RNA溶液,每0.4-4 mg RNA溶液加入1 ml RNA溶解-长效保存液,混匀。注意混合液中RNA溶解-长效保存液的体积百分比不低于80%。
2. 测定OD值。注意加入相应量的RNA溶解-长效保存液做空白。
3. 将溶解的RNA样品储存于−20 oC。
从RNA溶解-长效保存液中沉淀RNA:
1. 估计RNA溶液终体积。加入4倍体积的纯乙醇,混匀。如果溶液中RNA含量低于0.25 mg/ml,或者溶液体积过小操作不便,可先加入1/20体积的5 N NaCl混匀,然后再加入4倍体积乙醇。
2. 室温放置5分钟。
3. 12,000 rpm 5 min。弃上清。风干,溶解。
4. 重新沉淀的RNA溶解后可用于RT-PCR反应。也可用于任何其他实验。
直接使用RNA溶解-长效保存液中的RNA:
直接吸取RNA溶解-长效保存液中的RNA,进行普通或甲醛变性电泳和Northern Blot。进行甲醛变性电泳时,最后上样样品中的RNA溶解-长效保存液的浓度可高达50%。
注意:
1. 如果RNA用于逆转录RT-PCR,不推荐直接使用RNA溶解-长效保存液中的RNA,应该用乙醇沉淀RNA。
2. 在RNA溶解-长效保存液中的RNA的终浓度不应该超过4mg/ml。